葡萄糖6磷酸酶G6P测试盒_糖异生系列_分光法

测定方法：分光光度法

产品规格：50管/48样

注   意 ：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义：

葡萄糖-6-磷酸酶（(glucose 6 phosphatase，G6Pase，EC 3.1.3.9）广泛存在于动物、植物、微生物和细胞中，是糖异生过程水解葡萄糖-6-磷酸生成葡萄糖的限制酶，在保证血糖的动态平衡方面起着重要的作用。

测定原理：

G6P催化葡萄糖-6-磷酸生成葡萄糖，变旋酶和葡萄糖脱氢酶进一步依次催化NAD+还原生成NADH，在340nm下测定NADH生成速率，即可反映G6P活性。

需自备的仪器和用品：

紫外分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1 mL石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

试剂的组成和配制：

提取液：60mL×1瓶，4℃保存；

试剂一：液体47.5 mL×1瓶， 4℃保存；

试剂二：粉剂×1支，-20℃保存；

试剂三：粉剂×1支，-20℃保存；

试剂四：试剂×1支，-20℃保存；

葡萄糖6磷酸酶G6P测试盒_糖异生系列_分光法

样本的前处理：

1、细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

2、组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

3、血清（浆）样品：直接检测。

测定步骤：

1、分光光度计预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。

2、工作液的配制：临用前将试剂二、试剂三和试剂四转移到试剂一中混合溶解待用；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。

3、将工作液置于37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)预热5分钟。

4、 在1mL石英比色皿中加入50μL样本和950μL工作液，立即混匀，记录340nm处初始吸光值A1和 2min后的吸光值A2，计算ΔA=A2-A1。

注意：在该试剂盒中，若ΔA大于0.3，需将样本用提取液稀释适当倍数后测定，使ΔA小于0.3可提高检测

灵敏度。计算公式中乘以相应稀释倍数。