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磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶PEPCK测试盒_糖异生

  • 更新时间:  2022-07-28
  • 产品型号:  50管/48样
  • 简单描述
  • 磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶PEPCK测试盒_糖异生由上海晶抗生物公司提供,包括PEPCK说明书,免费代测,规格,包装,品牌等关于有关本司测试盒所有产品的详细介绍
详细介绍

磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶PEPCK测试盒_糖异生

测定方法:分光光度法

产品规格:50管/48样

注   意 :正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:

PEPCK(EC 4.1.1.32)广泛存在于动物、植物、微生物和细胞中,催化草酰乙酸转化为磷酸烯醇式丙酮酸,是调节糖异生途径的关键酶。

磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶PEPCK测试盒_糖异生

测定原理:

PEPCK催化草酰乙酸生成磷酸烯醇式丙酮酸和CO2,丙酮酸激酶和乳酸脱氢酶进一步依次催化NADH氧化生成NAD+,在340nm下测定NADH下降速率,即可反映PEPCK活性。

需自备的仪器和用品:

紫外分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1 mL石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

试剂的组成和配制:

提取液:60mL×1瓶,4℃保存;

试剂一:液体45 mL×1瓶, 4℃保存;

试剂二:液体41μL×1支,4℃保存;

试剂三:粉剂×1支, -20℃保存;

试剂四:粉剂×1支,-20℃保存;

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样本的前处理:

1、细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细菌或细胞加入1mL提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30次);8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

2、组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

3、血清(浆)样品:直接检测。

测定步骤:

1、分光光度计预热30min以上,调节波长至340nm,蒸馏水调零。

2、工作液的配制:临用前将试剂二和试剂三转移到试剂一中混合溶解待用;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。

3、试剂四的配制:临用前加入2.5mL蒸馏水充分溶解待用;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。

4、将工作液和试剂四置于37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)预热5分钟。

5、在1mL石英比色皿中加入50μL样本、50μL试剂四和900μL工作液,立即混匀,记录340nm处初


始吸光值A1和 1min后的吸光值A2,计算ΔA=A1-A2。

注意:在该试剂盒中,若ΔA大于0.1,需将样本用提取液稀释适当倍数后测定,使ΔA小于0.1可提高检测灵敏度。计算公式中乘以相应稀释倍数。




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