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脂肪酸代谢_肉毒碱棕榈酰转移酶CPT1测试盒

  • 更新时间:  2022-07-27
  • 产品型号:  100管/96样
  • 简单描述
  • 脂肪酸代谢_肉毒碱棕榈酰转移酶CPT1测试盒由上海纪宁生物公司提供,包括CPT1检测试剂盒说明书,免费代测,规格,包装,品牌等关于有关本司测试盒所有产品的详细介绍
详细介绍

脂肪酸代谢_肉毒碱棕榈酰转移酶CPT1测试盒

测定方法:微量法

产品规格:100管/96样

注   意 :正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:

肉毒碱棕榈酰转移酶是存在于线粒体内膜的一类酰基转移酶。可逆地催化从酰基CoA将酰基转移至L-肉毒碱的反应,在转运脂肪酸通过线粒体内膜的过程中起重要作用。

脂肪酸代谢_肉毒碱棕榈酰转移酶CPT1测试盒

测定原理:

基于肉碱和脂酰CoA在丙二酰CoA存在与否的条件下,通过肉碱脂酰转移酶(CPT-I)的作用,产生脂酰肉碱,并释放出巯基CoA(COA-SH),与Ellman试剂DN-TB反应后,产生的TNB。通过其吸收峰值得变化(412nm),来定量分析CPT-1的活性。

需自备的仪器和用品:

可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰、无水乙醇和蒸馏水

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试剂组成和配制:

试剂一:液体100mL×1瓶,-20℃保存;

试剂二:液体20mL×1瓶,-20℃保存;

试剂三:液体1.5mL×1支,-20℃保存;

试剂四:液体30mL×1瓶,4℃保存;

试剂五:粉剂×1瓶,4℃保存;

试剂六:粉剂×1支,-20℃保存;

样本的前处理:

组织、细菌或细胞中胞浆蛋白与线粒体蛋白的分离:

①称取约0.1g组织或收集500万细胞,加入1mL试剂一和10uL 试剂三,用冰浴匀浆器或研钵匀浆。

②将匀浆液于600g,4℃离心5min。

③弃沉淀,将上清液移至另一离心管中,11000g,4℃离心10min。

④上清液即胞浆提取物,可用于测定从线粒体泄漏的CPT-1(此步可选做)。

⑤在步骤④的沉淀中加入200uL试剂二和2uL 试剂三,超声波破碎(冰浴,功率20%或200W,超声3秒,间隔10秒,重复30次),用于线粒体CPT-1测定。

测定步骤:

1、分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至412nm,蒸馏水调零。

2、样本测定

(1)在试剂五中加入1mL无水乙醇,混匀,再加入22mL试剂四,混匀,37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)孵育5min;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融;

(2)在试剂六中加入1mL蒸馏水,混匀,37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)孵育5min;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融;

(3)在微量石英比色皿或96孔板中加入10μL样本、220μL试剂五和10μL试剂六,混匀,记录412nm处20秒时的初始吸光度A1和2分20秒时的吸光度A2,计算ΔA=A2-A1。



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