脂肪酸代谢系列_CoA羧化酶ACC测试盒_微量法

测定方法：微量法

产品规格：100管/48样

注   意 ：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义：

ACC在生物体内催化乙酰CoA羧化生成丙二酰CoA，是脂肪酸和许多次生代谢产物合成的关键酶。ACC的活性在一定程度上决定了脂肪酸的合成速度和含油量的高低。

测定原理：

ACC能够催化乙酰CoA、NaHCO3和ATP生成丙二酰CoA、ATP和无机磷，通过钼酸铵定磷法测定无机磷的增加量来测定ACC活性。

需自备的仪器和用品：

分光光度计/酶标仪、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。

试剂的组成：

提取液：100mL×1瓶，4℃保存；

试剂一：10mL×1瓶， 4℃保存；

试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存；

试剂三：粉剂×1瓶，-20℃保存；

试剂四：粉剂×1 瓶, 4℃保存。用时加入25mL蒸馏水，溶解后4℃可保存一周。

试剂五：粉剂×1瓶, 4℃保存。用时加入25mL蒸馏水，溶解后4℃可保存一周。

试剂六：液体 25mL×1 瓶，室温保存。

试剂七：10μmol/mL 标准磷贮备液 10mL×1 瓶，4℃保存。

脂肪酸代谢系列_CoA羧化酶ACC测试盒_微量法

样本的前处理：

1、细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

2、组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

测定步骤：

1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至660nm，蒸馏水调零。

2、酶促反应试剂的配制和预热：在试剂二瓶中加入2.5mL试剂一，充分溶解混匀；在试剂三瓶中加入2mL蒸馏水，充分溶解混匀；将试剂一、二、三在37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)预热10分钟。

3、定磷试剂的配制：按H2O: 试剂四:试剂五:试剂六=2:1:1:1 的比例配制，配好的定磷试剂

应为浅黄色，若无色则试剂失效，若是蓝色则为磷污染，定磷剂现用现配。