脂肪酸代谢系列_(FC)含量测试盒_微量法
脂肪酸代谢系列_(FC)含量测试盒_微量法
测定方法:微量法
产品规格:100管/96样
注 意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义:
FC是构成细胞膜的主要成分,也是合成肾上腺皮质激素、性激素、胆汁酸等生理活性物质的重要原料。FC浓度可作为脂代谢的指标。
脂肪酸代谢系列_(FC)含量测试盒_微量法
测定原理:
FC氧化酶催化FC生成△4-胆甾烯酮和H2O2,过氧化物酶催化H2O2、4-氨基和酚生成红色醌类化合物,在500nm有吸收峰,其颜色深浅与FC含量成正比。
自备仪器和用品:
水浴锅、可调式移液枪、酶标仪、96孔板、异丙醇和蒸馏水。
试剂组成和配置:
试剂一:异丙醇100mL(自备);
试剂二:液体20mL×1瓶,4℃保存;
试剂三:粉剂×1瓶,4℃保存;
试剂四:液体40μL×1瓶,4℃保存;
TC标准品:液体1mL×1支,0.5μmol/mL,4℃保存。
FC的提取:
1. 组织:按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL试剂一)进行冰浴匀浆。8000g,4℃离心10min,取上清置冰上待测。
2.细菌、真菌:先收集400-500万细胞或细菌到离心管内,弃上清,加1mL试剂一,超声波破碎1min(强度20%,超声2s,停1s),即FC待测液。
3.血清(浆)样品:直接测定。
测定操作:
1. 酶标仪预热30 min,调节波长到500 nm。
2. FC工作液的配制:临用前,吸取约0.8mL试剂二分别加入试剂三和试剂四瓶中,充分溶解后再全部转移回试剂二瓶中,充分混匀,FC工作液置于37℃水浴10min。用不完的工作液4℃保存一周。
3. 标准管:依次在96孔板中加入20μL FC标准液和180μL FC工作液,混匀,37℃静置3h后于500nm测定A标准管。
4. 测定管:依次在96孔板中加入20μL FC待测液和180μL FC工作液,混匀,37℃静置3h后于500nm测定A测定管。
5、空白管:依次在96孔板中加入20μL 试剂一和180μL FC工作液,混匀,37℃静置3h后于500nm测定
A测定管。
注意事项:
1、 标准管和空白管只要做一管。
2、 若测定管产生白色浑浊,可以将待测液用异丙醇稀释2~5倍后测定,并在后结果乘以相应倍数。