脂肪酸代谢系列_脂氧合酶LOX测试盒_微量法
脂肪酸代谢系列_脂氧合酶LOX测试盒_微量法
测定方法:微量法
产品规格:100管/48样
注 意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义:
LOX广泛存在于动植物组织中,催化不饱和脂肪酸氧化反应,导致膜脂过氧化。在生物体的生长发育、成熟衰老及逆境胁迫过程中具有重要作用。
脂肪酸代谢系列_脂氧合酶LOX测试盒_微量法
测定原理:
LOX催化氧化,氧化产物在280nm处有特征吸收峰;测定280nm吸光度增加速率,来计算LOX活性。
自备仪器和用品:
研钵、冰、台式离心机、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板(UV板)、可调式移液枪和蒸馏水。
试剂组成和配制:
试剂一:液体100mL×1瓶,4℃保存。
试剂二:液体20mL×1瓶,4℃保存。
试剂三:粉剂×1支,4℃保存。
粗酶液提取:
按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL试剂一)进行冰浴匀浆。16000g,4℃离心20min,取上清置冰上待测。
测定:
1. 分光光度计/酶标仪预热30 min以上,调节波长到280 nm,蒸馏水调零。
2. 在试剂三中加入10mL试剂二(振荡混匀1min),在30℃水浴中预热10 min以上。用不完的试剂4℃保存。
3. 对照管:依次在微量石英比色皿/96孔板中加入20μL样本和180μL试剂二,30℃反应30min后,记录A对照。
4. 测定管:依次在微量石英比色皿/96孔板中加入20μL样本和180μL试剂三,30℃反应30min后,记录A测定。
5. ΔA=A测定-A对照